بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم آلفاآمیلاز تولید شده توسط سویه بومی از باکتری exiguobacterium.sp .sh3

آنزیم آلفا آمیلاز مقاوم به دما کاربردهای تجاری وسیعی در فرآوری نشاسته، تخمیر و تهیه محصولات کربوهیدراتی داشته و جایگزین هیدرولیز شیمیایی نشاسته در فرآوری صنعتی شده است. در این مقاله بهینه سازی شرایط تولید آلفا آمیلاز سرمادوست در گونه ای از exigoubacterium.spsh3 بومی مورد توجه و بحث قرار می گیرد. در این مطالعه جداسازی قطعه کد کننده ژن آنزیم آلفا آمیلاز با استفاده از pcr و طراحی آغازگر های مناسب از باکتری exiguobacterium sp.sh3 انجام شد و سپس توالی ژن تحت پیشبر t7 در باکتری اشرشیاکلی سویه ی bl21 همسانه سازی و بیان گردید. سپس با تغییر شرایط بیان مانند غلظت iptg، زمان و دمای القا، بیان این آنزیم بهینه شد. در نهایت در شرایط بهینه، پروتئین در مقیاس بالا تهیه و با استفاده از دنباله های هیستیدینی اضافه شده به آغازگر ها و ستون نیکل خالص سازی شد و فعالیت آنزیم در نشاسته به عنوان سوبسترا تائید شد. پایداری آنزیم تولیدی، پس از تخلیص آن ،در برابر تغییرات دما، ph، فلزات یونی و حلال های مختلف ارزیابی شد. حداکثر میزان فعالیت آنزیم، در دمای 30 درجه سانتی گراد و 6/5= ph در طی 60 دقیقه می باشد. با افزودن غلظت های 5 و 10 میلی مولار یون های k+,ca2+, li2+, mg2+, و nacl به محیط کشت، میزان تولید آنزیم تا 40% افزایش یافت در حالی که غلظت های 5 و10میلی مولار یون های cu2+ ,zn2+ ,mn2+, و edta,sds,urea,، گوانیدین هیدروکلراید ، آمونیوم سولفات و یدواستات به موجب کاهش تولید شد. آنزیم آلفا آمیلاز تولید شده قادر به تحمل نمک nacl تا غلظت 5 مولار می باشد. در مقایسه با آنزیم ناخالص، خلوص آنزیم تخلیص شده 4/6 برابر گردید. این آنزیم در ژل الکترفورز sds- page با 1% نشاسته تک باند با وزن مولکولی 58 کیلو دالتون و فعالیت آمیلولیتیکی نشان داد. سویه exigoubacterium.sp.sh3 سطح مطلوبی از آلفا آمیلاز مقاوم به دما، متناسب با ویژگی های مورد نیاز فرآوری نشاسته و صنایع غذایی تولید می کند. فرآیند تولید، بعد از بهینه سازی، آلفا آمیلازهایی ساکروتروف با کارایی بالا در دماهای پایین که در صنایع مختلف بخصوص تولید پودرهای لباسشویی که فعالیت بالایی در آب سرد نیاز دارد ،می تواند در سطح تجاری مطرح شود.